克百威农残检测完整解决方案书——带柱后衍生的高效液相色谱法: 氨基甲酸酯类农药由于高效、经济而被广泛应用于蔬菜水果种植过程,但会对生态环境造成严重污染,并引发中毒。该类农残检测方法主要有液相色谱法、光谱法、气质联用等,其中柱后衍生的高效液相法方法简单,检测限低,已被农业部列为该类农残的标准检测方法。 样品中的氨基甲酸酯类农药及其代谢产物用乙腈提取,提取液经过滤、浓缩后,采用固相萃取技术进行分离、净化,淋洗液经浓缩后,使用带有荧光检测器和柱后衍生系统的液相色谱系统进行检测。 试剂:乙腈(色谱纯)、甲醇(色谱纯)、氯化钠(分析纯)、邻苯二甲醛(OPA, Pickering)、0.05mol/L NaOH溶液(Pickering)、OPA稀释液(Pickering)、巯基乙醇(Thiofluor,Pickering)、农药标准品(见表1)
材料:新鲜黄瓜 固相萃取柱(氨基柱,Aminopropyl,容积6mL,填充物500mg) 滤膜:0.45μm有机滤膜 梯度液相色谱系统——HX-2000二级柱后衍生系统——荧光检测器 榨汁机、匀浆机、氮吹仪、固相萃取仪 4.1 农药混合标准溶液的配制 将表1中的10种氨基甲酸酯类农药及其代谢产物标准品取各1mL混合置入容量瓶中,混匀后,取出一定量混合液,稀释200倍,待测。 4.2 样品的制备与净化 4.2.1 试样制备 按GB/T 8855抽取蔬菜样品,取可食部分,将其切碎,充分混匀,放入榨汁机中,制成待试样品,装于容器中待用。 4.2.2 提取 称取25g试样,放入匀浆机中,加入50.0mL乙腈,在匀浆机上高速匀浆2min后,用滤纸过滤,滤液收集到装有7g氯化钠的100mL具塞量筒中,收集40ml,盖上塞子,剧烈震荡1min,在室温下静置30min,使乙腈相和水相分层。 4.2.3 净化 参见农业部标准NY/T 761-2008[1] 4.3 色谱条件 4.3.1 色谱柱:农残专用色谱柱 4.3.2 柱温:45℃ 4.3.3 检测波长:激发波长330nm,发射波长465nm 4.3.4 梯度程序: 梯度程序如表2所示:
4.3.5 柱后衍生: 0.05mol/L氢氧化钠溶液,流速0.3mL/min,水解温度100℃ OPA试剂,流速0.3mL/min,衍生温度40℃ 4.4 样品的色谱分析 分别吸取5.00μL标准混合溶液和净化后的样品溶液注入液相色谱仪中,以保留时间定性,以样品溶液峰面积与标准溶液峰面积比例定量。 5.1 结果计算 试样中被测农药残留量以质量分数ω计,单位以mg/kg表示,按以下公式进行计算: 计算结果保留两位有效数字,当结果大于1mg/kg时保留三位有效数字。 5.2 结果与谱图 5.2.1 氨基甲酸酯类农药标准溶液进样结果 图1 氨基甲酸酯类农药标准溶液 1-涕灭威亚砜;2-涕灭威砜;3-灭多威;4-三羟基克百威;5-涕灭威;6-速灭威; 7-克百威;8-甲萘威;9-异丁威;10-仲丁威 图1为氨基甲酸酯类农药标准溶液进样结果,从图中可以看出十种标准品峰型完好,并且都能够达到基线分离。其各样品峰的保留时间如表3所示。 表3标准溶液进样结果
5.2.2 重复性实验
图2 氨基甲酸酯类农药标准溶液重复性实验谱图
图2是进样三针后的谱图重叠结果,从图中可以看出谱图重叠良好,说明此仪器和方法的重复性良好。 5.2.3 最低检测限实验 取氨基甲酸酯类农药标准溶液,将其稀释至0.01ppm,进样后的结果如图3所示。从图中可以看出0.01ppm的样品具有很好的响应,此仪器和方法完全适用于低浓度样品的检测。 图3 氨基甲酸酯类农药标准溶液检测限实验谱图 5.2.4 黄瓜中氨基甲酸酯类农药残留实验 将黄瓜样品处理、净化完毕并定容的样品进样5μL,结果如图4所示。经分析可知其黄瓜中含有灭多威,经计算可知黄瓜样品中灭多威的含量为0.33mg/kg,低于国标规定的蔬菜类最大检测浓度。 图4黄瓜中氨基甲酸酯类农残检测谱图
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